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免費待測,靈敏度高,重復性好,特異性強 |
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雞核心蛋白聚糖(DCN)ELISA試劑盒 重復性好
ELISA實驗通用規(guī)則
1、要移液槍的準確性，誤差不能超過2%?？捎盟碗娮犹炱竭M行確定。有人員進行矯正。
2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的后，要更換槍頭。即使是吸取品時。
3、要在實驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出，使各種試劑都恢復到室溫，以使結果更。
4、實驗時，要使底物避光保存。
5、用槍吸取時速度不能太快，以免產生氣泡而使吸取量不準確。
6、吸取時，要用量程和需要量接近的槍去吸，誤差。
7、將加到酶標孔中時，避免槍頭和孔內，可使槍頭上的液滴和孔壁，液滴會自然流下去。
8、全部加完后，可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒，混勻。也可以用酶標儀的晃動功能。
9、溫浴時，要用不干膠或膠帶紙封好酶標板，防止水分的蒸發(fā)。
10、洗板時，每次洗液加入后，應靜置1分鐘，使清洗更加。沒有洗板機時，倒去后，要將酶標板在報紙或毛紙上拍干。
11、洗液不夠時，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。
12、底物是光的，要在臨用前現(xiàn)配。
13、檢測前，要打開酶標儀，使之10分鐘以上。
14、底物有一定的毒性，終止液對皮膚有腐蝕性，應盡量避免。
15、待檢樣品要澄清，否則會影響結果。
16、溫浴時間應遵守試劑盒規(guī)定。
17、應盡量做雙孔實驗，這樣才能數(shù)據(jù)的準確性。
18、對結果有疑問的樣品要用其它進行確證。
做好對照
正式試驗時，應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應作一式二份，以實驗結果的準確性。有時本底較高，說明有非特反應，可采用羊、兔或BSA等封閉。
ELISA法是診斷中的一項新技術，現(xiàn)已成功地應用于多種病原微生物所引起的傳染病、病及非傳染病等方面的診斷。也已應用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定，根據(jù)已經(jīng)使用的結果，認為ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、及易于自動化操作等特點。不僅適用于臨床標本的檢查，而且由于之內可以檢查幾百甚至上千份標本,因此，也適合于流行病學調查。本法不僅可以用來測定，而且也可用于測定中的循環(huán)抗原，所以也是一種早期診斷的良好。因此ELISA法在生物醫(yī)學各領域的應用范圍日益擴大，
ELISA試劑盒的用法包括以下步驟：1.包被：用PH9.6的CBS包被液稀釋包被抗原至5μg/ml，酶標板中每孔加入50μl，室溫、4℃或37℃過夜包被。2.洗滌：棄包被液（拍干，再用無塵紙吸干），用PH7.2-7.4的1×PBST洗滌液洗板3次（每孔均要加滿），每次3min~5min。3.封閉：每孔加封閉液（1%BSA）250μl，37℃封閉2h。4.洗滌：用1×PBST洗滌液洗板3次，每次3min~5min。5.加樣：加入已經(jīng)稀釋好的樣品，37℃反應1h。一般樣本加入50-100μl，充分混勻。6.洗滌：用洗滌液洗板3次，每次3min~5min。7.加入酶標試劑：每孔加入100μl酶標溶液，37℃，1h。8.洗滌：用洗滌液洗板3次，每次3min~5min。9.顯色：每孔先加入顯色劑A液50μl，再加入顯色劑B液50μl，37℃避光10-15min。10.終止及測定：加入50μl終止液，終止反應，用酶標儀在450nm波長處測OD值。
雞核心蛋白聚糖(DCN)ELISA試劑盒 重復性好
實驗條件的選擇
在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:
（1） 固相載體的選擇：許多可作為固相載體，如聚氯、聚、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。常用的是40孔聚凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
（2） 包被（或抗原）的選擇：將（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時。蛋白質包被的適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質濃度（0.1、1.0和10μg/ml等）進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值。選擇OD而蛋白量少的濃度。對于多數(shù)蛋白質來說通常為1～10μg/ml。
（3） 酶標記工作濃度的選擇：用直接ELISA法進行初步效價的滴定（見酶標記部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標記分別為不同的稀釋度）在正式實驗里準確地滴定其工作濃度。
（4） 酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是、安全、有明顯地顯色反應，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。
