牛白介素8(IL-8)ELISA試劑盒

試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知濃度的品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將生物素標(biāo)記的同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關(guān)系。

 產(chǎn)品特點(diǎn)

一、、靈敏、特異的；

二、的重復(fù)性和可靠性；

三、吸附性能好，空白值低，孔底度高的固相載體；

四、適用、、組織勻漿液、細(xì)胞上清液、等等多種標(biāo)本類型；

五、節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)。

制備：

包括以下步驟：

(1)抗原表位的計(jì)算機(jī)篩選；

(2)抗原的制備；

(3)的采集；

(4)間接ELISA的建立；

(5)間接ELISA的性和特驗(yàn)證；

(6)試劑盒的性驗(yàn)證；

(7)對(duì)屠宰場(chǎng)進(jìn)行臨床檢測(cè)。該簡(jiǎn)單、快速、靈敏度高、特強(qiáng)、性合格、重復(fù)性好。應(yīng)用本發(fā)明制得的試劑盒能有效檢出感染豬的戊型，適用于大批量發(fā)病樣本的檢測(cè)，可用于豬戊肝的快速診斷，并預(yù)防、控制流行和由豬向人傳播。

ELISA的基礎(chǔ)是抗原或的固相化及抗原或的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或仍保持其學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或既保留其學(xué)活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的或抗原）與固相載體表面的抗原或起反應(yīng)。用洗滌的使固相載體上形成的抗原復(fù)合物與中的其他分開(kāi)。再加入酶標(biāo)記的抗原或，也通過(guò)反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了反應(yīng)的結(jié)果，使測(cè)定達(dá)到很高的度。 ELISA可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定。

ELISA檢劑盒應(yīng)用定性?shī)A心檢測(cè)技術(shù)，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條，這些多肽是型HEV毒株核心酸序列中抗原性很強(qiáng)的肽段，分別來(lái)自于該毒株的開(kāi)放閱讀框2和開(kāi)放閱讀框3。將樣品或品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM，這些就會(huì)與HEV 的多肽抗原結(jié)合，并固定在上面，洗板除去其它非特和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根過(guò)氧化物酶）酶結(jié)合物，經(jīng)第二次孵育后，酶結(jié)合物就會(huì)與次孵育結(jié)合上的HEV IgM相結(jié)合，洗板除去未結(jié)合的酶結(jié)合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育時(shí)會(huì)發(fā)生酶-底物反應(yīng)，只有那些含有HEV IgM和酶結(jié)合物所形成的復(fù)合物的孔才會(huì)發(fā)生顏色變化，加入溶液終止酶和底物間的反應(yīng)，并在波長(zhǎng): 450nm處測(cè)量O.D.值,按照本HEV IgMelisa試劑盒的, O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認(rèn)為是初試陽(yáng)性。

ELISA實(shí)驗(yàn)通用規(guī)則

1、要移液槍的準(zhǔn)確性，誤差不能超過(guò)2%?？捎盟碗娮犹炱竭M(jìn)行確定。有人員進(jìn)行矯正。

2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的后，要更換槍頭。即使是吸取品時(shí)。

3、要在實(shí)驗(yàn)前1小時(shí)將試劑盒從冰箱中取出，使各種試劑都恢復(fù)到室溫，以使結(jié)果更。

4、實(shí)驗(yàn)時(shí)，要使底物避光保存。

5、用槍吸取時(shí)速度不能太快，以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。

6、吸取時(shí)，要用量程和需要量接近的槍去吸，誤差。

7、將加到酶標(biāo)孔中時(shí)，避免槍頭和孔內(nèi)，可使槍頭上的液滴和孔壁，液滴會(huì)自然流下去。

8、全部加完后，可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動(dòng)30秒，混勻。也可以用酶標(biāo)儀的晃動(dòng)功能。

9、溫浴時(shí)，要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板，防止水分的蒸發(fā)。

10、洗板時(shí)，每次洗液加入后，應(yīng)靜置1分鐘，使清洗更加。沒(méi)有洗板機(jī)時(shí)，倒去后，要將酶標(biāo)板在報(bào)紙或毛紙上拍干。

11、洗液不夠時(shí)，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長(zhǎng)期保存。

12、底物是光的，要在臨用前現(xiàn)配。

13、檢測(cè)前，要打開(kāi)酶標(biāo)儀，使之10分鐘以上。

14、底物有一定的毒性，終止液對(duì)皮膚有腐蝕性，應(yīng)盡量避免。

15、待檢樣品要澄清，否則會(huì)影響結(jié)果。

16、溫浴時(shí)間應(yīng)遵守試劑盒規(guī)定。

17、應(yīng)盡量做雙孔實(shí)驗(yàn)，這樣才能數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。

18、對(duì)結(jié)果有疑問(wèn)的樣品要用其它進(jìn)行確證。

 ELISA檢劑盒應(yīng)用定性?shī)A心檢測(cè)技術(shù)，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條，這些多肽是型HEV毒株核心酸序列中抗原性很強(qiáng)的肽段，分別來(lái)自于該毒株的開(kāi)放閱讀框2和開(kāi)放閱讀框3。將樣品或品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM，這些就會(huì)與HEV 的多肽抗原結(jié)合，并固定在上面，洗板除去其它非特和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根過(guò)氧化物酶）酶結(jié)合物，經(jīng)第二次孵育后，酶結(jié)合物就會(huì)與次孵育結(jié)合上的HEV IgM相結(jié)合，洗板除去未結(jié)合的酶結(jié)合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育時(shí)會(huì)發(fā)生酶-底物反應(yīng)，只有那些含有HEV IgM和酶結(jié)合物所形成的復(fù)合物的孔才會(huì)發(fā)生顏色變化，加入溶液終止酶和底物間的反應(yīng)，并在波長(zhǎng): 450nm處測(cè)量O.D.值,按照本HEV IgMelisa試劑盒的, O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認(rèn)為是初試陽(yáng)性。