做好對(duì)照

正式試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)分別以陽性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高，說明有非特反應(yīng)，可采用羊、兔或BSA等封閉。

HBsAg試劑特點(diǎn)（檢測(cè)：臨床夾心法）：包被為山羊多抗。多抗具有高親和性和對(duì)抗原各種表位的反應(yīng)性。酶表為與HBsAg有不同結(jié)合位點(diǎn)的鼠復(fù)合單位，可測(cè)得HBsAg變異樣品，檢測(cè)的特（99.98%）檢測(cè)的靈敏度，應(yīng)用Parl Ehrich 學(xué)說（PEI）HBsAg品，對(duì)ad品的靈敏度為0.05ng/ml對(duì)ay品靈敏度為0.025ng/ml

ELISA試劑盒的用法包括以下步驟：1.包被：用PH9.6的CBS包被液稀釋包被抗原至5μg/ml，酶標(biāo)板中每孔加入50μl，室溫、4℃或37℃過夜包被。2.洗滌：棄包被液（拍干，再用無塵紙吸干），用PH7.2-7.4的1×PBST洗滌液洗板3次（每孔均要加滿），每次3min~5min。3.封閉：每孔加封閉液（1%BSA）250μl，37℃封閉2h。4.洗滌：用1×PBST洗滌液洗板3次，每次3min~5min。5.加樣：加入已經(jīng)稀釋好的樣品，37℃反應(yīng)1h。一般樣本加入50-100μl，充分混勻。6.洗滌：用洗滌液洗板3次，每次3min~5min。7.加入酶標(biāo)試劑：每孔加入100μl酶標(biāo)溶液，37℃，1h。8.洗滌：用洗滌液洗板3次，每次3min~5min。9.顯色：每孔先加入顯色劑A液50μl，再加入顯色劑B液50μl，37℃避光10-15min。10.終止及測(cè)定：加入50μl終止液，終止反應(yīng)，用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)OD值。

兔載脂蛋白C3(ApoC3)ELISA試劑盒

實(shí)驗(yàn)條件的選擇

在ELISA中，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的，其中包括:

（1）　固相載體的選擇：許多可作為固相載體，如聚氯、聚、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。常用的是40孔聚凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。

（2） 包被（或抗原）的選擇：將（或抗原）吸附在固相載體表面時(shí)，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg/ml等）進(jìn)行包被后，在其它試驗(yàn)條件相同時(shí)，觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD而蛋白量少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg/ml。

（3）　酶標(biāo)記工作濃度的選擇：用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定（見酶標(biāo)記部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記分別為不同的稀釋度）在正式實(shí)驗(yàn)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。

（4）　酶的底物及供氫體的選擇：對(duì)供氫體的選擇要求是、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是較為滿意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后，應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間，以10-30分鐘為宜。底物使用液新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。