牛細(xì)胞色素P450家族成員7A1(CYP7A1)ELISA試劑盒

實(shí)驗(yàn)原理

    ELISA運(yùn)用了學(xué)原理和化學(xué)反應(yīng)顯色原理，需要將抗原或預(yù)包被在固相載體表面，使后來形成的抗原--酶 (熒光基團(tuán)) -底物復(fù)合物黏附在載體上，通過檢測OD值或發(fā)光值，來檢測靶蛋白的含量。

ELISA試劑盒的操作步驟如下：1.包被：用PH9.6的CBS包被液稀釋包被抗原至5μg/ml，酶標(biāo)板中每孔加入50μl，室溫、4℃或37℃過夜包被。2.洗滌：棄包被液（拍干，再用無塵紙吸干），用PH7.2-7.4的1×PBST洗滌液洗板3次（每孔均要加滿），每次3min~5min。3.封閉：每孔加封閉液（1%BSA）250μl，37℃封閉2h。4.洗滌：用1×PBST洗滌液洗板3次，每次3min~5min。5.結(jié)合一抗：用1×PBST緩沖液1∶1000稀釋被檢，每孔100μl，要設(shè)立陰性對照，37℃孵育1.5h。6.洗滌：同上。7.結(jié)合酶標(biāo)二抗：每孔加1×PBST緩沖液1000倍稀釋的酶標(biāo)二抗羊抗鼠IgG-HRP（稀釋倍數(shù)根據(jù)產(chǎn)品不同有所不同，可按說明書進(jìn)行）50μl，37℃孵育1h.8.洗滌：同上。9.顯色：每孔加底物溶液（TMB）50μl，置室溫避光顯色10min。10.待顯色后，每孔加入50μl終止液（2mol/L H2SO4）終止反應(yīng)。使用酶標(biāo)儀讀取450nm的OD值，以確定水平。以上步驟僅供參考，具體操作請根據(jù)實(shí)際情況和產(chǎn)品說明書進(jìn)行。

酶聯(lián)吸附法（ELISA）的原理是利用抗原或與酶的結(jié)合，形成酶標(biāo)抗原或，保持其活性，同時(shí)又保留酶的活性。將抗原或與酶連接成酶標(biāo)記抗原或，它既保留了活性，又保留了酶的活性；在測定時(shí)，把受檢標(biāo)本(含待測或抗原)和酶標(biāo)抗原或按一定程序與結(jié)合在固相載體表面的抗原或起反應(yīng)形成固相化抗原-酶復(fù)合物，用洗滌的使固相載體上形成的抗原-酶復(fù)合物與其它成分分離，結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢的量成一定的比例，加入酶反應(yīng)的底物后，底物被固相載體上的酶催化生為有色產(chǎn)物，通過定性或定量檢測有色產(chǎn)物的量即可確定樣品中待測的含量。

酶聯(lián)吸附法（ELISA）在多個(gè)行業(yè)都有應(yīng)用，特別是在醫(yī)學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域中了廣泛應(yīng)用。以下是一些應(yīng)用ELISA的行業(yè)：1.醫(yī)學(xué)診斷：ELISA被廣泛應(yīng)用于各種和等的診斷，如、、結(jié)核病等。在動(dòng)物檢疫方面，ELISA已為廣泛采用的，例如用于診斷豬傳染性胃腸炎、牛副結(jié)核病、牛傳染性鼻氣管炎、豬偽、藍(lán)舌病等。2.生物技術(shù)研發(fā)：ELISA可以用于檢測生物分子，如蛋白質(zhì)、多肽、等，在生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。例如，在研發(fā)中，ELISA可以用于檢測的生物活性、與靶點(diǎn)的結(jié)合情況等。3.食品安全檢測：ELISA可以用于檢測食品中的有害，如殘留、獸藥殘留等，保障食品安全。4.監(jiān)測：ELISA可以用于評估水質(zhì)、空氣等指標(biāo)，監(jiān)測狀況。總之，酶聯(lián)吸附法在醫(yī)學(xué)、生物技術(shù)、食品安全和監(jiān)測等領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。

ELISA試劑盒的操作步驟如下：1.包被：用PH9.6的CBS包被液稀釋包被抗原至5μg/ml，酶標(biāo)板中每孔加入50μl，室溫、4℃或37℃過夜包被。2.洗滌：棄包被液（拍干，再用無塵紙吸干），用PH7.2-7.4的1×PBST洗滌液洗板3次（每孔均要加滿），每次3min~5min。3.封閉：每孔加封閉液（1%BSA）250μl，37℃封閉2h。4.洗滌：用1×PBST洗滌液洗板3次，每次3min~5min。5.結(jié)合一抗：用1×PBST緩沖液1∶1000稀釋被檢，每孔100μl，要設(shè)立陰性對照，37℃孵育1.5h。6.洗滌：同上。7.結(jié)合酶標(biāo)二抗：每孔加1×PBST緩沖液1000倍稀釋的酶標(biāo)二抗羊抗鼠IgG-HRP（稀釋倍數(shù)根據(jù)產(chǎn)品不同有所不同，可按說明書進(jìn)行）50μl，37℃孵育1h.8.洗滌：同上。9.顯色：每孔加底物溶液（TMB）50μl，置室溫避光顯色10min。10.待顯色后，每孔加入50μl終止液（2mol/L H2SO4）終止反應(yīng)。使用酶標(biāo)儀讀取450nm的OD值，以確定水平。以上步驟僅供參考，具體操作請根據(jù)實(shí)際情況和產(chǎn)品說明書進(jìn)行。

 操作步驟

1. 工作：將試劑盒從冰箱中取出，室溫放置30分鐘，使試劑盒恢復(fù)至室溫。同時(shí)好實(shí)驗(yàn)所需的材料和。

2. 加樣：在酶標(biāo)板的弟1個(gè)孔中加入品50μL，然后在后續(xù)的孔中依次加入待測樣本50μL。

3. 溫育：將酶標(biāo)板密封，在37℃下溫育30分鐘。

4. 洗滌：用洗滌液清洗酶標(biāo)板，共洗滌5次。每次洗滌后，用吸水紙輕輕吸干孔內(nèi)。

5. 加酶：在每個(gè)孔中加入酶標(biāo)物100μL。

6. 溫育：再次將酶標(biāo)板密封，在37℃下溫育30分鐘。

7. 洗滌：用洗滌液清洗酶標(biāo)板，共洗滌5次。每次洗滌后，用吸水紙輕輕吸干孔內(nèi)。

8. 加底物：在每個(gè)孔中加入底物A液50μL，再加入底物B液50μL。

9. 終止反應(yīng)：在每個(gè)孔中加入終止液50μL。

10. 檢測：用酶標(biāo)儀在450nm波長下讀取各孔的吸光度（OD值）。

牛細(xì)胞色素P450家族成員7A1(CYP7A1)ELISA試劑盒

結(jié)果分析

根據(jù)品和樣本的OD值，繪制曲線，從而計(jì)算出樣本中角蛋白1（KRT1）的濃度。具體分析可參劑盒說明書或相關(guān)文獻(xiàn)。

注意事項(xiàng)

1. 在操作中，應(yīng)保持酶標(biāo)板的干燥，避免水分進(jìn)入孔內(nèi)。

2. 加樣時(shí)需確保加樣準(zhǔn)確、無氣泡產(chǎn)生。

3. 溫育和洗滌中需嚴(yán)格控制時(shí)間和溫度，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

4. 在使用酶標(biāo)儀讀取OD值時(shí)，需確保波長設(shè)置正確，避免誤差產(chǎn)生。

5. 在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中，需保持操作的清潔和整潔，避免交叉污染。