雞紐蛋白(VCL)ELISA試劑盒 免費代測

要求

做好對照

正式試驗時，應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應作一式二份，以實驗結(jié)果的準確性。有時本底較高，說明有非特反應，可采用羊、兔或BSA等封閉。

實驗條件的選擇

在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:

（1）　固相載體的選擇：許多可作為固相載體，如聚氯、聚、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。常用的是40孔聚凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。

（2） 包被（或抗原）的選擇：將（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg/ml等）進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值。選擇OD而蛋白量少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg/ml。

（3）　酶標記工作濃度的選擇：用直接ELISA法進行初步效價的滴定（見酶標記部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標記分別為不同的稀釋度）在正式實驗里準確地滴定其工作濃度。

（4）　酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是、安全、有明顯地顯色反應，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。

進口分裝：

檢測范圍和靈敏度不同，用量少時，可使用分裝，前期是它的長久性不是很好。

試劑盒的曲線

試劑盒的曲線相關系數(shù)R≥0.98。

試劑盒重復性好，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均＜9 %。

試劑的組份都多給20%的富余量，確保完成48/96孔的檢測，避免分次檢測可能造成試劑量不足的情況。

檢測及酶結(jié)合物的稀釋度(均為1:30), 方便試驗操作者準確地做稀釋工作，實驗結(jié)果的重復性。

白介素6是一種細胞因子,已被證實為B細胞分化因子.它是一種形成,它的特性,如肝細胞急性蛋白合成的誘導和基于和白介素3協(xié)同作用的等,也備受關注. 并且已證實白介素-6與病理學存在的相關關系.例如,報道多種的生長因子為白介素-6, 瘤細胞能合成白介素-6并表達白介素-6受體.此外, 白介素6在多種炎性和自身發(fā)揮重要的作用. 此試劑盒能高靈敏度的檢測小鼠和細胞基質(zhì)上清的白介素6 原理 此試劑盒運用了兩種特,洗板后加入TMB底物液顯色,顯色的強度與小鼠的白介素-6的量成正比. 檢測范圍 10.94的 700 pg/mL 預期用途

試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)吸附實驗（ELISA）.已知濃度的品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將生物素標記的同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關系。

ELISA檢劑盒應用定性夾心檢測技術，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條，這些多肽是型HEV毒株核心酸序列中抗原性很強的肽段，分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。將樣品或品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM，這些就會與HEV 的多肽抗原結(jié)合，并固定在上面，洗板除去其它非特和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根過氧化物酶）酶結(jié)合物，經(jīng)第二次孵育后，酶結(jié)合物就會與次孵育結(jié)合上的HEV IgM相結(jié)合，洗板除去未結(jié)合的酶結(jié)合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育時會發(fā)生酶-底物反應，只有那些含有HEV IgM和酶結(jié)合物所形成的復合物的孔才會發(fā)生顏色變化，加入溶液終止酶和底物間的反應，并在波長: 450nm處測量O.D.值,按照本HEV IgMelisa試劑盒的, O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認為是初試陽性。

操作：

雙夾心法

1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個聚板的反應孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。

2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。

3.　加酶標：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。

4.　加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

5.　終止反應：于各反應孔中加入2M0.05ml。

6.　結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用觀察結(jié)果：反應孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

間接法

1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜；

2.次日洗滌3次；

3.加一定稀釋的待檢樣品（未知）0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌；

4.（同時做空白、陰性及陽性孔對照）于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二（抗）0.1ml；

5.37℃孵育35-60分鐘，洗滌；

6.一遍用DDW洗滌。

其余步驟同“雙夾心法”的4、5、6。