兔足盂蛋白(PCX)ELISA試劑盒可按要求定制

酶聯(lián)吸附法（ELISA）的原理是利用抗原或與酶的結(jié)合，形成酶標(biāo)抗原或，保持其活性，同時(shí)又保留酶的活性。將抗原或與酶連接成酶標(biāo)記抗原或，它既保留了活性，又保留了酶的活性；在測定時(shí)，把受檢標(biāo)本(含待測或抗原)和酶標(biāo)抗原或按一定程序與結(jié)合在固相載體表面的抗原或起反應(yīng)形成固相化抗原-酶復(fù)合物，用洗滌的使固相載體上形成的抗原-酶復(fù)合物與其它成分分離，結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢的量成一定的比例，加入酶反應(yīng)的底物后，底物被固相載體上的酶催化生為有色產(chǎn)物，通過定性或定量檢測有色產(chǎn)物的量即可確定樣品中待測的含量。

ELISA試劑盒的操作步驟如下：1.包被：用PH9.6的CBS包被液稀釋包被抗原至5μg/ml，酶標(biāo)板中每孔加入50μl，室溫、4℃或37℃過夜包被。2.洗滌：棄包被液（拍干，再用無塵紙吸干），用PH7.2-7.4的1×PBST洗滌液洗板3次（每孔均要加滿），每次3min~5min。3.封閉：每孔加封閉液（1%BSA）250μl，37℃封閉2h。4.洗滌：用1×PBST洗滌液洗板3次，每次3min~5min。5.結(jié)合一抗：用1×PBST緩沖液1∶1000稀釋被檢，每孔100μl，要設(shè)立陰性對照，37℃孵育1.5h。6.洗滌：同上。7.結(jié)合酶標(biāo)二抗：每孔加1×PBST緩沖液1000倍稀釋的酶標(biāo)二抗羊抗鼠IgG-HRP（稀釋倍數(shù)根據(jù)產(chǎn)品不同有所不同，可按說明書進(jìn)行）50μl，37℃孵育1h.8.洗滌：同上。9.顯色：每孔加底物溶液（TMB）50μl，置室溫避光顯色10min。10.待顯色后，每孔加入50μl終止液（2mol/L H2SO4）終止反應(yīng)。使用酶標(biāo)儀讀取450nm的OD值，以確定水平。以上步驟僅供參考，具體操作請根據(jù)實(shí)際情況和產(chǎn)品說明書進(jìn)行。

酶聯(lián)吸附法（ELISA）是一種靈敏、特異的學(xué)技術(shù)，常用于醫(yī)學(xué)、生物領(lǐng)域中的抗原或檢測。其操作步驟如下：1.包被：將抗原或與酶結(jié)合，形成酶標(biāo)抗原或，并固定在固相載體上。2.洗滌：去除未結(jié)合的和雜質(zhì)。3.封閉：加入封閉液，封閉固相載體上未結(jié)合的位點(diǎn)，以非特結(jié)合。4.洗滌：去除未結(jié)合的封閉液和雜質(zhì)。5.加樣：加入待檢測的樣本，使其與固相載體上的抗原或結(jié)合。6.洗滌：去除未結(jié)合的樣本和雜質(zhì)。7.加入酶標(biāo)：使固相載體上的抗原或與酶標(biāo)結(jié)合，將抗原或間接標(biāo)記上酶。8.洗滌：去除未結(jié)合的酶標(biāo)和雜質(zhì)。9.顯色：加入底物，使酶催化底物生成有色產(chǎn)物，根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進(jìn)行抗原或的定性或定量檢測。需要注意的是，具體的操作步驟可能因?qū)嶒?yàn)設(shè)計(jì)、試劑品牌等不同而有所差異。在進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格按照試劑盒說明書和實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)手冊進(jìn)行操作，控制好實(shí)驗(yàn)條件和操作步驟，以實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

雙夾心

本法主要用于檢測大分子抗原?，F(xiàn)以檢測雞傳染性法氏囊?。↖BDV）的雙夾心ELISA為例介紹本法的操作程序。

① 加包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干

② 加待檢抗原 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干

③ 加酶標(biāo) → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干

④ 加底物液　→ 37℃ 15分鐘，加終止液

⑤ 用ELISA檢測儀測定OD值。

雙夾心ELISA

此法與雙夾心ELISA的主要區(qū)別在于：它是采用酶標(biāo)抗檢查多種大分子抗原，它不僅不必標(biāo)記每一種，還可試驗(yàn)的性。此法的基本程序?yàn)椋?br />
① 加（Ab-1）包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干

② 加待檢抗原（Ag） → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干

③ 加用非同種動(dòng)物生產(chǎn)的特（Ab-2)→ 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干

④ 加入酶標(biāo)抗Ab-2（AB-3）→ 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干

⑤ 加底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液

⑥ 用ELISA檢測儀測定OD值。

競爭ELISA

此法主要用于測定小分子抗原及半抗原，其原理類似于放射測定。其基本程序?yàn)椋?br />
① 包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干

② 加入待檢抗原及一定量的酶標(biāo)抗原（對照孔僅加酶標(biāo)抗原）→ 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干

③ 加底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液

④ 用ELISA檢測儀測定OD值。

 

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