兔載脂蛋白(Apo)ELISA試劑盒
HBsAg試劑特點(diǎn)（檢測：臨床夾心法）：包被為山羊多抗。多抗具有高親和性和對抗原各種表位的反應(yīng)性。酶表為與HBsAg有不同結(jié)合位點(diǎn)的鼠復(fù)合單位，可測得HBsAg變異樣品，檢測的特（99.98%）檢測的靈敏度，應(yīng)用Parl Ehrich 學(xué)說（PEI）HBsAg品，對ad品的靈敏度為0.05ng/ml對ay品靈敏度為0.025ng/ml
組成結(jié)構(gòu)：
1、 ：操作中避免任何細(xì)胞。使用不含熱原和內(nèi)的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2、 ：EDTA、檸檬酸鹽、肝素可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細(xì)胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 組織勻漿：將組織加入適量鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。
5、 保存：如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
此IBL試劑盒能用于小鼠,EDTA,細(xì)胞上清中白介素-6的定量檢測
試劑盒成分
1 預(yù)包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 96T
2 酶標(biāo)記: (30倍濃縮)HRP標(biāo)記抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 0.4mL x 1
3 品: 重組小鼠白介素-6 0.5mL x 2
4 EIA緩沖液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 30mL x 1
5 標(biāo)記稀釋液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 12mL x 1
6 顯色劑: TMB底物液 15mL x 1
7 終止液: 1N 12mL x 1
8 濃縮洗滌液: (40倍濃縮) 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 50mL x 1 操作說明 1實(shí)驗(yàn)所需器材(但試劑盒沒有提供) 酶標(biāo)儀(450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及燒杯 去離子水 冰箱(4°C) 坐標(biāo)紙(log/log) 吸水紙 試管(用于品稀釋) 溫育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性試劑管(用于濃縮酶標(biāo)記和顯色劑)
ELISA試劑盒的操作步驟如下：1.包被：用PH9.6的CBS包被液稀釋包被抗原至5μg/ml，酶標(biāo)板中每孔加入50μl，室溫、4℃或37℃過夜包被。2.洗滌：棄包被液（拍干，再用無塵紙吸干），用PH7.2-7.4的1×PBST洗滌液洗板3次（每孔均要加滿），每次3min~5min。3.封閉：每孔加封閉液（1%BSA）250μl，37℃封閉2h。4.洗滌：用1×PBST洗滌液洗板3次，每次3min~5min。5.結(jié)合一抗：用1×PBST緩沖液1∶1000稀釋被檢，每孔100μl，要設(shè)立陰性對照，37℃孵育1.5h。6.洗滌：同上。7.結(jié)合酶標(biāo)二抗：每孔加1×PBST緩沖液1000倍稀釋的酶標(biāo)二抗羊抗鼠IgG-HRP（稀釋倍數(shù)根據(jù)產(chǎn)品不同有所不同，可按說明書進(jìn)行）50μl，37℃孵育1h.8.洗滌：同上。9.顯色：每孔加底物溶液（TMB）50μl，置室溫避光顯色10min。10.待顯色后，每孔加入50μl終止液（2mol/L H2SO4）終止反應(yīng)。使用酶標(biāo)儀讀取450nm的OD值，以確定水平。以上步驟僅供參考，具體操作請根據(jù)實(shí)際情況和產(chǎn)品說明書進(jìn)行。
90分鐘一步法ELISA試劑盒可以適用于、、組織勻漿、細(xì)胞上清液等樣本類型。這些樣本可以用于檢測、和其他微生物等病原體，以及、自身性等病理情況。同時，ELISA試劑盒還可以用于檢測濃度、維生素等營養(yǎng)，以及污染物等有害的殘留量。需要注意的是，不同樣本類型和檢測項(xiàng)目可能對ELISA試劑盒的靈敏度和特產(chǎn)生影響，因此在選擇使用ELISA試劑盒時需要根據(jù)具體情況進(jìn)行選擇。
兔載脂蛋白(Apo)ELISA試劑盒
試驗(yàn)原理
試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知濃度的品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將生物素標(biāo)記的同時溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關(guān)系。
自備材料
1． 蒸餾水。
2． 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
安全性
1． 避免直接終止液和底物A、B。一旦到這些，請盡快用水沖洗。
2． 實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
4． 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的品應(yīng)丟棄，不可保存。
5． 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
6． 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
7． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
8． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
9． 洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
10． 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光，避免長時間于光下。避免用手，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
11． 加入試劑的順序應(yīng)一致，以所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
12． 按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
兔載脂蛋白(Apo)ELISA試劑盒
做好對照
正式試驗(yàn)時，應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗(yàn)條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時本底較高，說明有非特反應(yīng)，可采用羊、兔或BSA等封閉。
實(shí)驗(yàn)條件的選擇
在ELISA中，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的，其中包括:
（1） 固相載體的選擇：許多可作為固相載體，如聚氯、聚、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。常用的是40孔聚凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
（2） 包被（或抗原）的選擇：將（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg/ml等）進(jìn)行包被后，在其它試驗(yàn)條件相同時，觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD而蛋白量少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg/ml。
（3） 酶標(biāo)記工作濃度的選擇：用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定（見酶標(biāo)記部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記分別為不同的稀釋度）在正式實(shí)驗(yàn)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
（4） 酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。
ELISA試劑盒檢測中的注意事項(xiàng)
1、要移液槍的準(zhǔn)確性，誤差不能超過2%。可用水和電子天平進(jìn)行確定。有人員進(jìn)行矯正。
2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的后，要更換槍頭。即使是吸取品時。
3、要在實(shí)驗(yàn)前1小時將試劑盒從冰箱中取出，使各種試劑都恢復(fù)到室溫，以使結(jié)果更。
4、實(shí)驗(yàn)時，要使底物避光保存。
5、用槍吸取時速度不能太快，以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。
6、吸取時，要用量程和需要量接近的槍去吸，誤差。
7、將加到酶標(biāo)孔中時，避免槍頭和孔內(nèi)，可使槍頭上的液滴和孔壁，液滴會自然流下去。
8、全部加完后，可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動30秒，混勻。也可以用酶標(biāo)儀的晃動功能。
9、溫浴時，要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板，防止水分的蒸發(fā)。
10、洗板時，每次洗液加入后，應(yīng)靜置1分鐘，使清洗更加。沒有洗板機(jī)時，倒去后，要將酶標(biāo)板在報(bào)紙或毛紙上拍干。
11、洗液不夠時，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。
12、底物是光的，要在臨用前現(xiàn)配。
13、檢測前，要打開酶標(biāo)儀，使之10分鐘以上。
14、底物有一定的毒性，終止液對皮膚有腐蝕性，應(yīng)盡量避免。
15、待檢樣品要澄清，否則會影響結(jié)果。
16、溫浴時間應(yīng)遵守試劑盒規(guī)定。
17、應(yīng)盡量做雙孔實(shí)驗(yàn)，這樣才能數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。
18、對結(jié)果有疑問的樣品要用其它進(jìn)行確證。
